Para realizar uma subtração no Excel, basta utilizar o sinal de menos (-) entre os valores que você quer subtrair.
Por exemplo, para subtrair o valor de B1 do valor de A1, o formula ficaria assim:
=A1-B1
Também é possível subtrair mais de dois valores ao mesmo tempo, basta separá-los por vírgulas. Por exemplo, para subtrair B1, C1 e D1 de A1, o formula ficaria assim:
=A1-B1-C1-D1
Lembrando que é importante utilizar o sinal de menos em todos os valores que você deseja subtrair.